Podocytes are thought to be injured

Podocytes are thought to be injured at an earlystage in DN; therefore, we investigated thefunctional role of miR-134-5p in podocyteapoptosis. First, anti-miR-ctrl or anti-miR-134-5p was transfected into HG-treated podocytesprior to analysis by qRT-PCR. Importantly, therelative expression of miR-134-5p in HG-treatedpodocytes transfected with anti-miR-134-5pwas signiﬁcantly reduced compared with that incells transfected with anti-miR-ctrl (Figure 2B).Next, we used qRT-PCR and western blotting to examine the effect of miR-134-5p on the expressionof nephrin, a key marker ofpodocytes in the ﬁltrationslits. Notably, mRNA andprotein levels of nephrinwere signiﬁcantly increased in HG-treated podocytes transfected with anti-miR-134-5p compared with thatin cells transfected withanti-miR-ctrl (Figure 2C-E).In addition, we performedﬂow cytometry and westernblotting to detect apopto-sis in podocytes. We foundthat the apoptosis rate andlevels of cleaved caspase3 decreased in HG-treatedpodocytes transfected withanti-miR-134-5p, comparedwith that in cells transfect-ed with anti-miR-ctrl (Figure2F, 2G). In contrast, NG-treated podocytes trans-fected with miR-ctrl or miR-134-5p showed theopposite results (Figure S1). These results indi-cate that miR-134-5p acts as a promoter ofpodocyte apoptosis.

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据认为 ，DN 早期足细胞受到了损伤；因此，我们研究了 miR-134-5p在足细胞 凋亡中的功能性作用。首先，在通过qRT-PCR分析之前，将抗miR-ctrl或抗miR-134-5p 转染入经HG处理的足细胞 。重要的是，与抗miR-ctrl转染的细胞相比 ，miR-134-5p在经 抗miR-134-5p转染的HG处理的足细胞中的相对表达 显着降低 （图2B）。 接下来，我们使用qRT-PCR和Western blotting检查了miR-134-5p对肾素的表达的影响 ，nephrin是 过滤 缝隙中足细胞的关键标志物。值得注意的是， nephrin的mRNA和蛋白质水平 与 转染 抗miR-ctrl的细胞相比，转染了抗miR- 134-5p的HG处理足细胞明显增加（图2C-E）。 另外，我们进行了 流式细胞术和 蛋白质印迹法以检测 足细胞的凋亡。我们发现，与转染抗miR-ctrl的细胞相比，转染了抗miR-134-5p的HG处理的足细胞 的凋亡率和 裂解的caspase 3水平降低（图2F，2G）。相反，用miR-ctrl或miR-134-5p转染的NG处理足细胞显示了相反的结果（图S1）。这些结果表明 认为miR-134-5p充当 足细胞凋亡的启动子。

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Podocytes are thought to be injured at an early stage in DN; therefore, we investigated the functional role of miR-134-5p in podocyte apoptosis. First, anti-miR-ctrl or anti-miR-134- 5p was transfected into HG-treated podocytes prior to analysis by qRT-PCR. Importantly, the relative expression of miR-134-5p in HG-treated podocytes transfected with anti-miR-134-5p was signiﬁcantly reduced compared with that in cells transfected with anti-miR-ctrl (Figure 2B). Next, we used qRT-PCR and western blotting to examine the effect of miR-134-5p on the expression of nephrin, a key marker of podocytes in the ﬁltration slits. Notably, mRNA and protein levels of nephrin were signiﬁcantly increased in HG-treated podocytes transfected with anti-miR- 134-5p compared with that in cells transfected with anti-miR-ctrl (Figure 2C-E). In addition, we performed ﬂow cytometry and western blotting to detect apopto- sis in podocytes. We found that the apoptosis rate and levels of cleaved caspase 3 decreased in HG-treated podocytes transfected with anti-miR-134-5p, compared with that in cells transfect- ed with anti-miR-ctrl (Figure 2F, 2G). In contrast, NG-treated podocytes trans-fected with miR-ctrl or miR-134-5p showed the opposite results (Figure S1). These results indi- cate that miR-134-5p acts as a promoter of podocyte apoptosis.

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足细胞被认为是在早期受损 因此，我们调查了 miR-134-5p在足细胞中的功能作用 细胞凋亡。首先，反miR ctrl或anti-miR-134- 5p基因转染到HG处理的足细胞中 qRT-PCR分析前。重要的是 miR-134-5p在HG处理后的相对表达 转染抗miR-134-5p的足细胞 与年相比明显减少 转染抗miR-ctrl的细胞（图2B）。 接下来，我们用qRT-PCR和western-blotting检测miR-134-5p对表达的影响 一个关键的标志物 足细胞 裂缝。值得注意的是，mRNA和 nephrin蛋白水平 转染抗miR的HG处理足细胞显著增加- 134比5便士 转染细胞 防miR控制（图2C-E）。 此外，我们还表演了 流式细胞术和西方 印迹法检测凋亡因子- 足细胞内sis。我们发现了 细胞凋亡率 裂解caspase水平 HG处理降低了3 足细胞转染 抗miR-134-5p，比较 在细胞内转染- 带反miR控制的ed（图 2F，2G）。相反，用miR-ctrl或miR-134-5p转染的NG处理足细胞显示 相反的结果（图S1）。这些结果表明- 说明miR-134-5p是 足细胞凋亡。

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